流式細(xì)胞術(shù)是一種定量分析技術(shù)，是指利用
BD_FACSCalibur流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞特異性標(biāo)記熒光信號而測定細(xì)胞的多種生物物理性質(zhì)的方法，同時也是一項可以把具有某相同熒光信號特性的某些細(xì)胞亞群從多細(xì)胞群體中分離和富集出來的細(xì)胞分析技術(shù)。
流式細(xì)胞儀的應(yīng)用
1、DNA倍體分析
DNA分析是流式細(xì)胞儀初且是現(xiàn)在應(yīng)用zui廣檢測項目。由于惡性細(xì)胞DNA含量通常與正常細(xì)胞不同，存在異倍體細(xì)胞，所以現(xiàn)有很研究評價異倍體細(xì)胞與腫瘤惡性度及其預(yù)后的關(guān)系。DNA含量檢測還可提供細(xì)胞周期方面的信息，這在細(xì)胞生物學(xué)中運(yùn)用很廣泛。特別地，它可表示出細(xì)胞毒性藥物對細(xì)胞作用過程。這些DNA檢測還可與細(xì)胞表面標(biāo)志物標(biāo)記同時進(jìn)行，這樣在細(xì)胞混合培養(yǎng)中，可通常追蹤表達(dá)特異標(biāo)志物的細(xì)胞顯示其生長周期情況。所有方法都是基于染料能與核酸起特異的化學(xué)反應(yīng)并發(fā)射出熒光，常用的染料為PI，DAPI。
2、細(xì)胞生存能力實驗
使用Heochest 33342染料與DNA特異性結(jié)合，后因細(xì)胞活力不同染料的結(jié)合程度也各異，故可評估細(xì)胞的活性度。
3、計數(shù)外周血中檢測網(wǎng)織紅細(xì)胞
使用TO染料能夠特異性地與RNA結(jié)合，結(jié)合系數(shù)高達(dá)3000，故具有很好的性價比。
4、外周血、骨髓采集物中CD34陽性干細(xì)胞計數(shù)，臨床上用于骨髓移植前干細(xì)胞數(shù)理的測定。使用標(biāo)準(zhǔn)ISHAG方案，需要DNA或其他核染料占用FITC通道，PE標(biāo)記CD34抗體，PE-CY5標(biāo)記CD45抗體。
5、交叉淋巴細(xì)胞、粒細(xì)胞毒實驗
檢測識別供體血清中免疫球蛋白與受體粒細(xì)胞之間是否存在反應(yīng)有著重要臨床意義，因為這種反應(yīng)會導(dǎo)致移植后發(fā)熱、移植后肺損傷及免疫性粒細(xì)胞缺乏癥。流式細(xì)胞儀可檢測全血樣本與血清孵育后粒細(xì)胞上結(jié)合的人免疫球蛋白。FITC標(biāo)記人免疫球蛋白抗體、PE標(biāo)記粒細(xì)胞表面標(biāo)志物、PE-CY5標(biāo)記HLA抗體。
6、血小板自身抗體檢測
BD_FACSCalibur流式細(xì)胞儀血小板自身抗體識別人血小板抗原，會引起各種臨床相關(guān)癥狀，如新生兒自免性血小板減少癥、輸血后紫癜、難治性血小板減少。流式細(xì)胞可快速準(zhǔn)確地檢測血小板自身抗體。FITC標(biāo)記抗人免疫球蛋白抗體、PE標(biāo)記識別血小板抗體。
7、移植交叉配型
原細(xì)胞毒實驗，主要用于避免移植物超急性排拆反應(yīng)。流式細(xì)胞儀用于監(jiān)測T或B細(xì)胞是否受到受體血清中免疫球蛋白攻擊，作為HLA配型前的預(yù)實驗。流式細(xì)胞儀因其高精確性已成為該領(lǐng)域內(nèi)的金標(biāo)準(zhǔn)。FITC標(biāo)記抗人免疫球蛋白抗體、PE標(biāo)記識別T細(xì)胞CD3或B細(xì)胞CD29抗體。
8、檢測細(xì)胞經(jīng)抗原或細(xì)胞有絲分裂刺激后活化效應(yīng)淋巴細(xì)胞早期活化指標(biāo)CD69可用來檢測免疫治療效果。流式細(xì)胞使用三色分析可監(jiān)測淋巴細(xì)胞各亞群活化情況：FITC標(biāo)記的CD3抗體、PE標(biāo)記的CD8抗體、PE-CY5標(biāo)記的CD69抗體。
9、細(xì)胞增殖狀態(tài)檢測
核增殖抗PCNA、Ki67、BrdUrd用于衡量細(xì)胞增殖分裂狀況，在評估腫瘤預(yù)后有重要意義。為些標(biāo)志物的檢測一般同細(xì)胞表面標(biāo)志物同時檢測。FITC標(biāo)記PCNA或Ki67或BrdUrd，PE或(并)PE-CY5標(biāo)記細(xì)胞表面標(biāo)志物。
10、染色體分析
BD_FACSCalibur流式細(xì)胞儀染色分析運(yùn)用兩種特異性染料：Hoechest33258與核苷酸AT結(jié)合;Chromomycin A3與GC相結(jié)合。從而在雙參數(shù)坐標(biāo)上根據(jù)染色體ATCG含量的不同識別各種染色體。平時進(jìn)行的染色體分析耗時且需要操作者ji具經(jīng)驗，而用流式細(xì)胞儀時可快速地識別出異常染色體，如加配分選系統(tǒng)可將這些異常染色體分選出來作進(jìn)一步分析。
